器材和试剂:
  1. 倒置相差显微镜,具有10×物镜;
  2. 标注体积刻度的试管(圆锥形底);
  3. 改良的Neubauer血细胞计数器;
  4. 计数器盖玻片;
  5. 袖珍管或等体积的塑料容器,如试管或离心管;
  6. 巴斯德吸管(短型和长型);
  7. 可调体积的微量加样器(100—250μl);
  8. 无菌枪尖;
  9. 无菌刻度吸管(1—10ml)、洗耳球或自动移液装置;
  10. 10g/L台盼蓝;
  11. Hanks平衡盐溶液或储存培养基;
  实验方法:
  1. 准备计数器。轻轻地湿润中央网络区域的各个边,用两个拇指的压力使盖玻片水平地从边缘滑动。当在中央标记区临近的任何一边能看见牛顿环(彩虹色)时,盖玻片位置正确;
  2. 1000r/min离心细胞悬液5min,弃上清。将细胞重悬于已知体积的培养基中;
  3. 用巴斯德吸管来回吹打细胞悬液几次,混匀,确定细胞均匀分散;
  4. 用微量加样器吸取250μl混匀的细胞悬液,转入袖珍管。用一个干净的加样器尖吸取等体积台盼蓝溶液加入细胞悬液中。用拇指和食指快速轻弹袖珍管几次使之混匀。立即用一个巴斯德吸管尖吸取一滴细胞悬液,轻轻地将其滴在临近计数区的盖玻片边缘上。毛细作用使细胞悬液移到盖玻片下面,填满中央和边缘沟之间的区域。在盖玻片的另一边重复该操作;
  5. 将计数器放于显微镜载物台上,移动载物台直到将三条平行线界定的25个小方格的网格位于中央为止。计25个小方格内的总细胞数(染色和未染色的)(它们每一个又再分为16个更小的方格便于计数)。为了避免将同一个细胞重复计数,只数三线隔开的压上线、左手线和中央区的细胞。如果细胞数大可用一个计数器;
  6. 数完总细胞数时,在相同区域重复计数,只数蓝染(死)的细胞。计算死细胞的平均数,从总细胞数中扣除死细胞数得到活细胞数;
  7. 应用以下公式计算细胞群的存活率:
  存活率=活细胞数/(活细胞数+死细胞数)×100%
  8. 细胞悬液的细胞浓度按照一下方法计算:
  1个大格(25个小格)的平均细胞数×104=细胞数/ml
  9. 细胞悬液总细胞数=细胞数/ml×总体积
  10. 细胞悬液总的活细胞数=总细胞数×存活率(%)