1、制备底层培养基:取直径为90mm平皿,注入约15mL-20mL加热融化的培养基(其中塑料平皿加入15mL,玻璃平皿加入20mL),使其在平皿底部均匀摊布,放置在水平台面上使其凝固,作为底层;
    2、制备菌层 :另取适量培养基加热融化后,放冷至48-50℃(芽孢可至60℃),加入适量的菌悬液(能得到清晰的抑菌圈为度),摇匀,用移液器(枪头灭菌)吸取5 mL上述培养基快速注入平皿中央,按同一方向轻轻摇动平皿使其在底层上均匀摊布,作为菌层(注意事项:菌层培养基表面一定要平整,否则会导致漏液)放置在水平台上冷却;
    3、放置HB四连式牛津杯 :用无菌镊子夹住HB四连式牛津杯正面的凸点(中央有凸点且平衡翼上标有“海博生物”字体的为产品正面),将其放置在菌层培养基表面上,将压杯板盖上,压住牛津杯5秒左右,使4个小杯与培养基表面紧密接触,防止出现缝隙导致漏液,然后小心拿走压杯板(压杯板已经辐照灭菌,可以直接使用;多次使用,可用酒精棉擦拭即可);
    4、加入抗生素,进行培养 :向小杯中加入抗生素,将平皿平稳转移至培养箱培养(转移过程中轻拿轻放,避免剧烈震动)……